Merite extraordinare ale ELISA ultrasensibil cu ciclare Thio-NAD în determinarea proteinei NS1 a denguei
1. Introducere
Febra dengue este o boală infecțioasă acută cauzată devirusul dengue prin mușcătura unui țânțar din specia Aedes infectat (Ae. aegypti sau Ae. albopictus),cu simptome principale precum febră mare, amețeli, durere de cap, erupții cutanate șidureri severe (dureri oculare, musculare, articulare sau osoase), etc. Această boală este larg răspândită în climatele tropicale și subtropicale. Se estimează că 100 până la 400 de milioane de persoane sunt infectate anual, dintre care peste 80% sunt de obicei ușoare și asimptomatice. Cu toate acestea, febra dengue severă poate crește riscul de deces dacă nu este tratată corespunzător. Astfel, diagnosticarea precoce a acestei boli este semnificativă pentru tratamentul la timp.De remarcat, proteina non-structurală 1 (NS1), o glicoproteină înalt conservată, este secretată în principal în timpul infecției cuvirusuldengue, fiind considerată intens ca principalul factor patogenic alfebrei dengue. Prin urmare, NS1 este utilizată în general ca biomarker pentru detectarea precoce a acestei boli.
În acest studiu, un test imunosorbent legat de enzime tip sandwich (ELISA) în combinație cumetoda de ciclare a nicotinamidei adenin dinucleotide tio (thio-NAD/S-NAD)(denumită în continuare ELISA ultrasensibil) este utilizată pentru a detecta NS1, urmată de compararea cu NAAT pentru a confirma acuratețea detectării.
2. Avantaje și dezavantaje ale metodelor tradiționale de detectare pentrufebrei dengue
În prezent,există patru metode principale de detectarepentru febrei dengue.
Izolarea virală și identificarea au specificitate ridicată, dar consumă timp, necesitând cel puțin 5 zile. Testul rapid antigen este cel mai rapid și mai eficient din punct de vedere al costurilor dintre celelalte metode, dar sensibilitatea și specificitatea sunt relativ scăzute. Testul serologic bazat pe IgM și IgG este limitat de numărul de zile de infecție, deoareceniveluriletestul trebuie amânat până când nivelul anticorpilor crește la un nivel detectabil.
În clinică, NAAT este adesea aplicat pentru a determinafebrei dengue datorită sensibilității și specificității sale ridicate. Cu toate acestea, această metodă este costisitoare, laborioasă și predispusă la fals pozitivitate, trebuind să fie efectuată de personal instruit.Pentru a depăși dezavantajele acestor metode, o nouă metodă de detectareELISA ultrasensibil este aplicată în acest studiu.
3. Fluxul de lucru al ELISA ultrasensibil cu ciclare thio-NAD
O pereche de anticorpiest utilizați pentru captarea proteinei NS1 în ELISA sandwich, și fosfatază alcalinăest marcată pe anticorpul secundar. Pe lângă anticorpi, un derivat de androsteron, 3α-hidroxisteroid dehidrogenază, thio-NAD și NADHsunt utilizați pentru a construi sistemul de ciclare enzimatică thio-NAD. În timpul reacției de ciclare thio-NAD, thio-NADH se acumulează constant într-un mod de număr triunghiular și poate fi măsurat direct la o absorbanță de 405 nm.
4. Compararea ELISA ultrasensibil și NAAT în detectarea proteinei NS1 dengue
În NAAT, 60 de probe sunt pozitive pentru dengue, iar 25 sunt negative pentru dengue. Valoarea pragului de ciclare (CT) NAAT a acestor probe pozitive pentru dengue a variat între 12,42 și 31,41.În ELISA ultrasensibil, 59 de probe sunt corespunzător pozitive la rezultatele NAAT, în timp ce 25 de probe sunt complet corespunzător negative la rezultatele NAAT.Comparativ cu NAAT, sensibilitatea și specificitatea ELISA ultrasensibil sunt de 98,3% și, respectiv, 100% (Tabelul 2). Dintre cele 60 de probe de pacienți pozitivi pentru dengue confirmați prin NAAT, doar 1 probă este negativă în ELISA ultrasensibil. Datele NAAT au arătat că proba este un caz de infecție cu DENV tip 4 cu o valoare CT de 21,59. Rezultatele ELISA ultrasensibil sunt în acord aproape perfect cu rezultatele NAAT, cu o valoare kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Concluzie
Metoda ELISA ultrasensibil este ușor de efectuat și nu necesită operatori profesioniști instruiți. ADetectarea poate fi începută imediat după primirea unei probe mici. Este deosebit de potrivită pentru detectarea precoce avirusulbolii în țările cu venituri mici.Referință
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Avantajele și caracteristicile produsuluiBONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC este una dintre puținele întreprinderi dinChina care pot produce Thio-NAD, cu„Bonzyme” Metoda integral-enzimatică ( fără reziduuri de solvenți nocivi;fără reziduuri de solvenți nocivi) și tehnologia unică de purificare în șapte etape “Bonpure”. BONTAC integrează cercetare-dezvoltare, producție și vânzare, cu fabrici proprii și un număr de certificări internaționale pentru a asigura calitate înaltă și aprovizionare stabilă a produselor.
