Cuantificarea NAD+ și metaboliții săi în nervii sciatici de șoarece

Introducere

Părțile cruciale ale nicotinamidei adenin dinucleotide (NAD+) și metaboliții săi în îmbătrânire și neurodegenerare au fost recunoscute pe scară largă. Pentru a stimula progresul către cercetarea biochimică și intervențiile care vizează îmbătrânirea și bolile neurodegenerative, este de mare importanță să cuantificăm cu precizie NAD+ și nivelurile sale de metaboliți în calea de salvare a NAD+. Aici, se aplică o metodă robustă și precisă LC-MS/MS pentru a cuantifica nivelurile de NAD+ și metaboliții săi în nervul sciatic normal și lezat de șoarece.

Limitări ale metodelor existente de cuantificare a NAD+ și a metaboliților săi

Metodele tradiționale de cuantificare a NAD+ și a metaboliților săi, cum ar fi HPLC-UV, RMN, electroforeza zonei capilare sau testele enzimatice colorimetrice, se confruntă cu diverse provocări în ceea ce privește sensibilitatea, selectivitatea și măsurarea indirectă. În ceea ce privește testele LC-MS/MS existente pentru măsurătorile NAD+ celulare sau tisulare și metaboliții săi, există încă multe dificultăți de depășit, cum ar fi timpii de funcționare prelungiți, comportamentul slab de retenție cromatografică și formele de vârf nesatisfăcătoare. Mai mult, doar una până la trei substanțe din calea de salvare NAD+ pot fi acoperite prin aceste metode.

Modificările metodei LC-MS/MS

Pe baza testelor LC-MS/MS existente, se efectuează modificările privind condițiile cromatografice, matricea surogat și condițiile MS/MS. Mai exact, 5 μM de acid metilen fosfonic este folosit ca aditiv de fază mobilă, care promovează în mod explicit intensitatea semnalului și forma vârfului. Având în vedere natura relativ curată și simplă a probelor și dimensiunea lor mică, apa ultrapură este testată ca matrice înlocuitoare. În loc de coloana de cromatografie lichidă cu interacțiune hidrofilă și coloana de hipercarb, se utilizează coloana Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, a cărei tehnologie unică de suprafață de înaltă performanță MaxPeak HPS (pasivarea peretelui interior al coloanei, eliminarea suprafeței metalice) permite reproductibilitatea ridicată, simetria de vârf și separarea de bază a tuturor analiților.În plus, condițiile MS sunt optimizate pentru a minimiza semnalul de interferență NAD+ în canalul ciclic de adenozină difosfat riboză (cADPR), menținând în același timp răspunsul cADPR și nicotinamidă mononucleotidă (NMN), cu 4000 V pentru tensiunea de pulverizare ionică, 450 ° C pentru temperatura turboîncălzitorului, 50 psi pentru gaz 1, 50 psi pentru gaz 2, 30 psi pentru gaz cortina și 12 psi pentru gaz de coliziune.

Cromatograma reprezentativă a probelor de nerv (normal vs lezat)

Toți cei cinci analiți realizează separarea inițială, unde cADPR este un biomarker sensibil în modelul de neurodegenerare. În acest caz, axotomia nervului sciatic induce degenerescența axonală, ducând la reducerea nivelului de NAD+ și la creșterea nivelului NMN în nervii răniți, rezultând o creștere de aproximativ 2 ori a raportului NMN/NAD+. În același timp, nivelurile de nicotinamidă (NAM) și adenozin difosfat riboză (ADPR) sunt scăzute de aproximativ 2 ori, în timp ce nivelul cADPR este crescut de peste 8 ori. Aceste rezultate sunt în concordanță cu cele ale cercetărilor raportate anterior, verificând acuratețea acestei metode LS-MS/MS modificate în cuantificarea NAD+ și a metaboliților săi.

Concluzie

Această metodă modificată de LC-MS/MS permite separarea inițială eficientă a NAD+, NMN, NAM, ADPR și cADPR într-o scurtă durată de 5 minute, ceea ce contribuie la diagnosticarea precoce a diferitelor tulburări neurologice și la dezvoltarea de medicamente pentru îmbătrânire și boli neurodegenerative.

Referință

Ma Y, Deng L, Du Z. Dezvoltarea și validarea unei metode LC-MS/MS pentru cuantificarea NAD+ și a metaboliților înrudiți la nervii sciatici de șoareci și aplicarea acesteia la un model animal de leziuni nervoase. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821

BONTAC NAD

BONTAC este dedicat cercetării și dezvoltării, fabricării și vânzării de materii prime pentru coenzime și produse naturale din 2012, cu fabrici proprii, peste 170 de brevete globale, precum și o echipă puternică de cercetare și dezvoltare. BONTAC are o bogată experiență în cercetare și dezvoltare și tehnologie avansată în biosinteza NAD și precursorii săi (ex. NMN și NR). Există diferite tipuri de NAD care trebuie selectate, cuprinzând NAD ER Grade (eliminarea endoxinei), NAD Grade I (IVD / supliment alimentar / pulbere brută cosmetică), NAD Grade II (API / intermediari) și NAD Grade IV (dacă există cerințe mai mari privind solubilitatea), care pot fi furnizate sub formă de pulbere liofilizată sau pulbere cristalină. Puritatea BONTAC NAD poate ajunge la peste 98%.

Disclaimer

Acest articol se bazează pe referința din revista academică. Informațiile relevante sunt furnizate numai în scopuri de partajare și învățare și nu reprezintă niciun scop de consiliere medicală. Dacă există vreo încălcare, vă rugăm să contactați autorul pentru ștergere. Opiniile exprimate în acest articol nu reprezintă poziția BONTAC. În niciun caz BONTAC nu va fi responsabil sau răspunzător în niciun fel pentru orice pretenții, daune, pierderi, cheltuieli sau costuri care rezultă sau decurg direct sau indirect din încrederea dumneavoastră în informațiile și materialele de pe acest site web.