Merite extraordinare ale ELISA ultrasensibil cu ciclul Thio-NAD în determinarea proteinei Dengue NS1

1. Introducere

Febra dengue este o boală infecțioasă acută cauzată de Virusul Dengueprin mușcătura unui țânțar infectat din specia Aedes (Ae. aegypti sau Ae. albopictus), cu principalele simptome, cum ar fi febră mare, amețeli, dureri de cap, erupții cutanate și Severădureri (dureri oculare, musculare, articulare sau osoase) etc. Această boală este răspândită pe scară largă în climatele tropicale și subtropicale. Se estimează că între 100 și 400 de milioane de oameni sunt infectați în fiecare an, în timp ce peste 80% sunt de obicei ușoare și asimptomatice. Cu toate acestea, febra Dengue severă poate crește riscul de deces dacă nu este tratată corespunzător. Astfel, diagnosticul precoce al acestei boli este semnificativ pentru tratamentul ei în timp util.

Este de remarcat faptul că proteina nestructurală 1 (NS1), o glicoproteină foarte conservată, este secretată în principal în timpul infecției cu Dengue virus, care este considerat în mod intens ca principalul factor de patogeneză al Febra Dengue. Prin urmare, NSI este utilizat în general ca biomarker pentru detectarea precoce a acestei boli.

În acest studiu, un test imunoenzimatic sandwich(ELISA)în combinație cu tio nicotinamidă adenină dinucleotidă (tio-NAD/S-NAD) metoda de ciclism (denumit în continuare ELISA ultrasensibil) este utilizat pentru a detecta NSI, urmat de comparația cu NAAT pentru a confirma acuratețea detectării acestuia.

2. Avantajele și dezavantajele metodelor tradiționale de detecție pentru Febra Dengue 

În prezent, tIată patru metode principale de detectare pentru Febra Dengue.


Izolarea și identificarea virală au o specificitate ridicată, dar necesită mult timp, durând cel puțin 5 zile. Testul rapid de antigen este cel mai rapid și mai eficient din punct de vedere al costurilor dintre celelalte metode, dar sensibilitatea și specificitatea sunt relativ scăzute. Testul serologic bazat pe IgM și IgG este limitat de numărul de zile de infecție, deoarece cel testul trebuie amânat până când nivelul de anticorpi crește la un nivel detectabil.

În clinică, NAAT este adesea aplicat pentru a determina Febra Dengueprin murdărie de sensibilitate și specificitate ridicată. Cu toate acestea, această metodă este costisitoare, laborioasă și predispusă la falsă pozitivitate, care trebuie efectuată de personalul instruit. Pentru a depăși dezavantajele acestor metode, o nouă metodă de detectare ELISA ultrasensibil este aplicat în acest studiu.

3. Fluxul de lucru al ELISA ultrasensibil cu ciclul tio-NAD

O pereche de anticorpi eutilizat pentru captarea proteinei NS1 în sandvișul ELISA și fosfatazei alcaline emarcat pe anticorpul secundar. În afară de anticorpi, un derivat de androsteron, 3α-hidroxisteroid dehidrogenază, tio-NAD și NADH Suntfolosit pentru a construi sistemul de ciclare enzimatică tio-NAD. În timpul reacției ciclice tio-NAD, tio-NADH s-a acumulat constant într-un mod triunghiular și a putut fi măsurat direct la o absorbanță de 405 nm.

4. Comparația dintre ELISA ultrasensibil și NAAT în detectarea proteinei Dengue NS1

În NAAT, 60 de exemplare sunt pozitive pentru dengue și 25 sunt negative pentru dengue. Valoarea pragului de ciclu NAAT (CT) al acelor probe pozitive pentru dengue a variat de la 12,42 la 31,41. În ELISA ultrasensibil, 59 de specimene sunt pozitive în mod corespunzător la rezultatele NAAT, în timp ce 25 de specimene sunt complet negative la rezultatele NAAT.

Comparativ cu NAAT, sensibilitatea și specificitatea ELISA ultrasensibilă sunt de 98,3% și, respectiv, 100% (Tabelul 2). Din 60 de probe de pacienți pozitivi pentru dengue confirmate de NAAT, doar 1 probă este negativă în ELISA ultrasensibil. Datele NAAT au arătat că proba este un caz de infecție cu DENV de tip 4 cu o valoare CT de 21,59. Rezultatele ELISA ultrasensibil sunt în acord aproape perfect cu rezultatele NAAT, cu o valoare kappa de 0,972 (IÎ 95%: 0,917-1.0).

5. Concluzie

Metoda ELISA ultrasensibilă este ușor de realizat și nu necesită cursanți profesioniști pentru a funcționa. Detectarea poate fi începută imediat după primirea unei probe mici. Este deosebit de potrivit pentru detectarea precoce a bolii Dengue în țările cu venituri mici.

Referință

Chen, Po-Kai et al. "Metoda avansată de detectare a proteinei Dengue NS1 folosind ELISA ultrasensibil cu ciclul Thio-NAD". Viruși vol. 15,9 1894. 8 septembrie 2023, doi:10.3390/v15091894

Avantajele și caracteristicile produsului BONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC este oUna dintre puținele întreprinderi din Chinacare pot produce Thio-NADcu "Bonzyme"Metoda enzimatică integrală(Ecologic;fără reziduuri de solvenți dăunători) și tehnologie unică de purificare în șapte pași "Bonpure". BONTAC integrează cercetarea și dezvoltarea, producția și vânzarea, cu fabrici proprii și o serie de certificări internaționale pentru a asigura o calitate înaltă și o aprovizionare stabilă a produselor.

Disclaimer

BONTAC nu își asumă nicio responsabilitate pentru nicio pretenție care decurge direct sau indirect din încrederea dumneavoastră în informațiile și materialele de pe acest site web.