Meritele extraordinare ale ELISA ultrasensibil cu ciclul Thio-NAD în determinarea proteinei Dengue NS1

1. Introducere

Febra dengue este o boală infecțioasă acută cauzată deVirusul Dengueprin mușcătura unei specii infectate de țânțar Aedes (Ae. aegypti sau Ae. albopictus),cu principalele simptome, cum ar fi febră mare, amețeli, dureri de cap, erupții cutanate șiSeverădureri (dureri oculare, musculare, articulare sau osoase) etc. Această boală este răspândită pe scară largă în climatele tropicale și subtropicale. Se estimează că între 100 și 400 de milioane de oameni sunt infectați în fiecare an, în timp ce peste 80% sunt de obicei ușoare și asimptomatice. Cu toate acestea, febra Dengue severă poate crește riscul de deces dacă nu este tratată corespunzător. Astfel, diagnosticul precoce al acestei boli este semnificativ pentru tratamentul său în timp util.

De remarcat faptul că proteina nestructurală 1 (NS1), o glicoproteină foarte conservată, este secretată în principal în timpul infecției cuDenguevirus, care este considerat în mod intensiv ca fiind principalul factor de patogeneză alFebra dengue. Prin urmare, NSI este în general utilizat ca biomarker pentru detectarea precoce a acestei boli.

În acest studiu, un test imunoabsorbant legat de enzime sandwich(ELISA)în combinație cudinucleotidă de tionicotinamidă adenină (tio-NAD/S-NAD)metoda de ciclism (denumit în continuare ELISA ultrasensibil) este utilizat pentru a detecta NSI, urmat de compararea cu NAAT pentru a confirma acuratețea detectării acestuia.

2. Avantajele și dezavantajele metodelor tradiționale de detectare pentruFebra dengue 

În prezent, tIată patru metode principale de detectarepentru Febra dengue.


Izolarea și identificarea virală au o specificitate ridicată, dar necesită mult timp, durând cel puțin 5 zile. Testul rapid antigen este cel mai rapid și mai eficient din punct de vedere al costurilor dintre celelalte metode, dar sensibilitatea și specificitatea sunt relativ scăzute. Testul serologic bazat pe IgM și IgG este limitat de numărul de zile de infecție, deoarececeltrebuie amânat până când nivelul anticorpilor crește la un nivel detectabil.

În clinică, NAAT este adesea aplicat pentru a determinaFebra dengueprin murdăria sensibilității și specificității sale ridicate. Cu toate acestea, această metodă este costisitoare, laborioasă și predispusă la fals pozitiv, care trebuie efectuată de personalul instruit.Pentru a depăși dezavantajele acestor metode, o nouă metodă de detectareELISA ultrasensibil este aplicat în acest studiu.

3. Fluxul de lucru al ELISA ultrasensibil cu ciclul tio-NAD

O pereche de anticorpieutilizat pentru captarea proteinei NS1 din sandwich ELISA și a fosfatazei alcalineeetichetat pe anticorpul secundar. În afară de anticorpi, un derivat de androsteron, 3α-hidroxisteroid dehidrogenază, tio-NAD și NADHSuntutilizat pentru a construi sistemul de ciclu enzimatic tio-NAD. În timpul reacției de ciclu tio-NAD, tio-NADH s-a acumulat constant într-un număr triunghiular și a putut fi măsurat direct la o absorbanță de 405 nm.

4. Comparația dintre ELISA ultrasensibil și NAAT în detectarea proteinei Dengue NS1

În NAAT, 60 de specimene sunt pozitive pentru dengue și 25 sunt negative pentru dengue. Valoarea pragului de ciclu NAAT (CT) a acestor specimene pozitive pentru dengue a variat de la 12,42 la 31,41.În ELISA ultrasensibil, 59 de eșantioane sunt în mod corespunzător pozitive pentru rezultatele NAAT, în timp ce 25 de eșantioane sunt complet negative pentru rezultatele NAAT.

În comparație cu NAAT, sensibilitatea și specificitatea ELISA ultrasensibil sunt de 98,3% și, respectiv, 100% (Tabelul 2). Din 60 de probe de pacienți pozitive pentru dengue confirmate NAAT, doar 1 probă este negativă în ELISA ultrasensibil. Datele NAAT au arătat că specimenul este un caz de infecție cu DENV de tip 4 cu o valoare CT de 21,59. Rezultatele ELISA ultrasensibile sunt aproape perfect în acord cu rezultatele NAAT, cu o valoare kappa de 0,972 (IÎ 95%: 0,917-1.0).

5. Concluzie

Metoda ELISA ultrasensibilă este ușor de realizat și nu necesită stagiari profesioniști pentru a opera. Detectarea poate fi începută imediat după primirea unei probe mici. Este deosebit de potrivit pentru detectarea precoce a bolii Dengue în țările cu venituri mici.

Referință

Chen, Po-Kai et al. "Metoda avansată de detectare a proteinei Dengue NS1 folosind ELISA ultrasensibil cu ciclul Thio-NAD." Virusuri vol. 15,9 1894. 8 septembrie 2023, doi:10.3390/v15091894

Avantajele și caracteristicile produsuluiBONTAC Thio-NAD/S-NAD

BONTAC este ouna dintre puținele întreprinderi dinChinacare poate produce Thio-NADcu"Bonzimă"Metoda enzimatică întreagă(ecologic;fără reziduuri de solvenți dăunători) și tehnologia unică de purificare în șapte pași "Bonpure". BONTAC integrează cercetarea și dezvoltarea, producția și vânzarea, cu fabrici proprii și o serie de certificări internaționale pentru a asigura o calitate înaltă și o aprovizionare stabilă a produselor.

Disclaimer

BONTAC nu își asumă nicio responsabilitate pentru orice pretenții care decurg direct sau indirect din încrederea dumneavoastră în informațiile și materialele de pe acest site web.