Introducere
Părțile cruciale ale nicotinamidei adenină dinucleotidei (NAD+) și metaboliții săi în îmbătrânire și neurodegenerare au fost recunoscute pe scară largă. Pentru a stimula progresul către cercetarea biochimică și intervențiile care vizează îmbătrânirea și bolile neurodegenerative, este de mare importanță să cuantificăm cu precizie nivelurile de NAD+ și metaboliții săi în calea de salvare a NAD+. Aici, o metodă LC-MS/MS robustă și precisă este aplicată pentru a cuantifica nivelurile de NAD+ și metaboliții săi în nervul sciatic normal și rănit de șoarece.
Limitări ale metodelor existente de cuantificare a NAD+ și a metaboliților săi
Metodele tradiționale de cuantificare a NAD+ și a metaboliților săi, cum ar fi HPLC-UV, RMN, electroforeza zonei capilare sau testele enzimatice colorimetrice, se confruntă cu diverse provocări în ceea ce privește sensibilitatea, selectivitatea și măsurarea indirectă. În ceea ce privește testele LC-MS/MS existente pentru măsurătorile celulare sau tisulare NAD+ și metaboliții săi, există încă multe dificultăți de depășit, cum ar fi timpii de rulare prelungiți, comportamentul slab de retenție cromatografică și formele nesatisfăcătoare ale vârfurilor. Mai mult, doar una până la trei substanțe din calea de salvare NAD+ pot fi acoperite de aceste metode.
Modificările metodei LC-MS/MS
Pe baza testelor LC-MS/MS existente, se efectuează modificări privind condițiile cromatografice, matricea surogat și condițiile MS/MS. Mai exact, 5 μM de acid metilen fosfonic este folosit ca aditiv de fază mobilă, care promovează în mod explicit intensitatea semnalului și forma vârfului. Având în vedere natura relativ curată și simplă a probelor și dimensiunea lor mică, apa ultrapură este testată ca matrice înlocuitoare. În loc de coloană de cromatografie lichidă cu interacțiune hidrofilă și coloană de hipercarb, se utilizează coloana Waters Atlantis Premier BEH C18 AX, a cărei tehnologie unică de suprafață de înaltă performanță MaxPeak HPS (pasivarea peretelui interior al coloanei, eliminarea suprafeței metalice) permite reproductibilitatea ridicată, simetria de vârf și separarea liniei de bază a tuturor analiților. În plus, condițiile MS sunt optimizate pentru a minimiza semnalul de interferență NAD+ în canalul ciclic de adenozin difosfat riboză (cADPR), menținând în același timp răspunsul cADPR și mononucleotidă de nicotinamidă (NMN), cu 4000V pentru tensiunea de pulverizare a ionilor, 450 ° C pentru temperatura încălzitorului turbo, 50 psi pentru gaz 1, 50 psi pentru gaz 2, 30 psi pentru gazul de cortină și 12 psi pentru gazul de coliziune.
Cromatograma reprezentativă a probelor de nervi (normal vs rănit)
Toți cei cinci analiți realizează separarea inițială, unde cADPR este un biomarker sensibil în modelul de neurodegenerare. În acest caz, axotomia nervului sciatic induce degenerescență axonală, ducând la reducerea nivelului de NAD+ și la creșterea nivelului de NMN în nervii răniți, rezultând o creștere de aproximativ 2 ori a raportului NMN/NAD+. În același timp, nivelurile de nicotinamidă (NAM) și adenozin difosfat riboză (ADPR) sunt scăzute de aproximativ 2 ori, în timp ce nivelul de cADPR este crescut de peste 8 ori. Aceste rezultate sunt în concordanță cu cele ale cercetărilor raportate anterior, verificând acuratețea acestei metode LS-MS/MS modificate în cuantificarea NAD+ și a metaboliților săi.
Concluzie
Această metodă LC-MS/MS modificată permite separarea eficientă a liniei de bază a NAD+, NMN, NAM, ADPR și cADPR într-o scurtă durată de 5 minute, ceea ce contribuie la diagnosticarea precoce a diferitelor tulburări neurologice și la dezvoltarea de medicamente pentru îmbătrânire și boli neurodegenerative.
Referință
Ma Y, Deng L, Du Z. Dezvoltarea și validarea unei metode LC-MS/MS pentru cuantificarea NAD+ și a metaboliților înrudiți la nervii sciatici ai șoarecilor și aplicarea acesteia la un model animal de leziuni nervoase. J Chromatogr A. doi:10.1016/j.chroma.2024.464821
BONTAC NAD
BONTAC este dedicat cercetării și dezvoltării, fabricării și vânzării de materii prime pentru coenzime și produse naturale din 2012, cu fabrici proprii, peste 170 de brevete globale, precum și o echipă puternică de cercetare și dezvoltare. BONTAC are o bogată experiență în cercetare și dezvoltare și tehnologie avansată în biosinteza NAD și a precursorilor săi (de ex. NMN și NR). Există diferite tipuri de NAD care pot fi selectate, cuprinzând NAD ER Grade (îndepărtarea endoxinei), NAD Grade I (IVD / supliment alimentar / pulbere brută cosmetică), NAD Grade II (API / intermediate) și NAD Grade IV (dacă există cerințe mai mari privind solubilitatea), care pot fi furnizate sub formă de pulbere liofilizată sau pulbere cristalină. Puritatea BONTAC NAD poate ajunge la peste 98%.
Disclaimer
Acest articol se bazează pe referința din revista academică. Informațiile relevante sunt furnizate numai în scopuri de partajare și învățare și nu reprezintă niciun scop de consiliere medicală. Dacă există vreo încălcare, vă rugăm să contactați autorul pentru ștergere. Opiniile exprimate în acest articol nu reprezintă poziția BONTAC. În niciun caz BONTAC nu va fi responsabil sau răspunzător în niciun fel pentru orice pretenții, daune, pierderi, cheltuieli sau costuri care rezultă sau decurg direct sau indirect din încrederea dumneavoastră în informațiile și materialele de pe acest site web.